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寡核酸修饰专家
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NGS 接头合成

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产品名称:NGS 接头合成

服务内容:

专业的合成和纯化服务,每一条测序引物,接头,index经过严格质控,为您的实验保驾护航,适用于NGS(illumina)平台,分子检测与基因诊断;高稳定性,高纯度,定量精准,无交叉污染,医学检验佳选;
 

修饰说明
磷酸化(Phosphorylation)5'磷酸化可用于接头、克隆和基因构建以及连接酶催化的连接反应。3'磷酸化可抗3'外切酶消化的相关实验中,也用于阻止DNA聚合酶催化的DNA链延伸反应。
内部氨基修饰主要用C6-dT aminolinker来加到胸腺嘧啶残基上来进行内部修饰。修饰后氨基与主链相距10个原子距离,可用于进一步的标记和酶连接(如碱性磷酸酶),目前提供内部氨基修饰介导的dT-Dabcyl、dT-Biotin和dT-Digoxingenin 修饰。
5'氨基修饰可用于制备功能化的寡核苷酸,广泛应用在DNA芯片(DNA Microarray)和多重标记诊断系统。目前提供5' C6 氨基修饰和5' C12氨基修饰两种,前者可用于连接一些即便靠近寡核苷酸也不会影响其功能的化合物,后者用于亲和纯化基团的连接和一些荧光标记,尤其是当荧光可能会因标记太靠近DNA链而被淬灭时。
3'氨基修饰目前提供3' C6 氨基修饰。它可用于设计新的诊断探针和反义核苷酸,例如5'端可用高度敏感的32P或荧光素标记的同时3'可用氨基修饰以进行其他的连接。此外,3'修饰可以抑制3'外切酶酶解,从而可用于反义实验。
巯基(Thiol)5'-巯基在很多方面与氨基修饰类似。巯基可用于加附各种修饰如荧光标记物和生物素。例如可以在DYS和马来酰亚胺衍生物存在下来制作巯基连接的荧光探针。5'的巯基修饰主要用5'巯基修饰单体(5'-Thiol-Modifier C6-CE Phosphoramidite 或Thiol-Modifier C6 S-S CE Phosphoramidite)。用5'-Thiol-Modifier C6-CE单体修饰后必须进行硝酸银氧化以去除保护基(trityl),而Thiol-Modifier C6 S-S CE单体修饰后须用DTT将二硫键还原成巯基。
间臂(Spacer)Spacer 可为寡核苷酸标记提供必要的间隔以减少标记基团与寡核苷酸间的相互作用,主要应用于DNA发夹结构和双链结构研究。C3 spacer 主要用于模仿核糖的3'和5'羟基间的三碳间隔,或"替代"一个序列中未知的碱基。3'-Spacer C3用于引进一个3'间臂从而阻止3'端外切酶和3'端聚合酶发挥作用。 Spacer 18 常用于引进一个强亲水基团。
硫代(Phosphorthioate)硫代修饰的寡核苷酸主要用于反义实验中防止被核酸酶降解。您可以选择全硫代,但随着硫代碱基的增加,寡核苷酸的Tm值会降低,为了降低这种这种影响,可以对引物两端2-5个碱基进行硫代修饰,通常可以选择5'和3'各3个碱基进行硫代修饰。
锁核酸(LNA)一种特殊的双环状核苷酸衍生物,结构中含有一个或多个2 ′-O,4′-C-亚甲基-β-D-呋喃核糖核酸单体,核糖的2′-O位和4′-C位通过不同的缩水作用形成氧亚甲基桥、硫亚甲基桥或胺亚甲基桥,并连接成环形,这个环形桥锁定了呋喃糖C3′-内型的N构型,降低了核糖结构的柔韧性,增加了磷酸盐骨架局部结构的稳定性.由于LNA与DNA/RNA在结构上具有相同的磷酸盐骨架,故其对DNA、RNA有很好的识别能力和强大的亲和力.与其他寡核苷酸类似物相比,LNA有很多优点:a.和DNA、RNA互补的双链有很强的热稳定性(ΔTm=3~8℃);b.抗3′脱氧核苷酸酶降解的稳定性;c.LNA-DNA杂交物能激活RNase H;d.水溶性好,自由穿入细胞膜,易被机体吸收;e.体内无毒性作用;f.高效的自动寡聚化作用,合成方法相对简单,部分或完全修饰的LNA寡核酸链可用氨基磷酸法在DNA自动合成仪上合成。


服务承诺:
提供Thermo LTQ XL 高精度质谱报告和 Waters 高效液相色谱纯度检测报告;
高精度质谱,单一主峰,理论分子量与检测分子量一致;纯度大于90%;
提供探针设计问题反馈与交流,博士技术支持指导;

服务特色:
超短链DNA/RNA合成,可提供短至2nt DNA/RNA合成服务。
超长链DNA/RNA合成,可提供最长200nt DNA、70nt RNA合成服务。
DNA/RNA修饰种类多,经验丰富。
修饰DNA/RNA合成质谱全检,waters高效液相色谱全检,客户可放心使用。
合成规模灵活,可提供微克至百克级合成服务。
发货迅速,常规修饰2-3个工作日发货。
临床检测级别纯度大于99%,高稳定性,无交叉污染。

寡核苷酸应如何保存?
DNA干粉很稳定,-20℃下保存2年没问题。DNA的溶解可以用无菌的水或TE,溶解后的DNA最好分装置于-20℃保存于-20℃,且在使用时避免反复冻融。短期内(2、3个星期)反复使用的DNA可在4℃保存。溶解后的DNA应避免室温存放,一般在室温放置超过一周的不建议继续使用。
RNA由于其稳定性远差于DNA,因此 不论是干粉还是溶液状态,都建议在-80℃保存,若无条件,则存放于-20℃,且溶液状态的RNA要避免反复冻融。修饰寡核苷酸建议最高存放于-20℃,带荧光的修饰需要避光保存。

 


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